"300: Rise of an Empire" perustuu Frank Millerin sarjakuvaromaaniin "Xerxes" ja se on kuvattu samaan henkeäsalpaavaan tyyliin kuin sen erinomaisesti menestynyt edeltäjä. Tämä eeppisen saagan uusi luku vie seikkailun uudelle taistelukentälle, merelle, missä kreikkalainen kenraali Themistokles yrittää yhdistää kaikki kreikkalaiset saman lipun alle johtamalla heidät taisteluun, joka muuttaa koko sodan kulun. "300: Rise of an Empire" asettaa vastakkain Themistokleen ja hyökkäävän Persian armeijan, jota johtavat kuolevaisesta jumalaksi muuttunut Kserkses ja Persian laivaston kostonhimoinen komentaja Artemisia.